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生化检测试剂盒
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以下是植物植物β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)ELISA试剂盒的标准操作流程及关键要点:
BS-5023 植物β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)ELISA试剂盒
一、实验原理
采用双抗体夹心法:包被抗体捕获样本中的GUS后,加入HRP标记检测抗体形成复合物,TMB显色(蓝色→黄色),450nm波长下OD值与GUS浓度正相关。
二、样本处理
组织提取:
取5-50mg叶片/愈伤组织,加入GUS缓冲液匀浆,16000×g离心15分钟取上清。
蛋白浓度调整为0.1mg/mL后立即检测或-80℃保存。
保存要求:
避免使用含NaN3的样本(抑制HRP活性)。
短期保存于-20℃,避免反复冻融。
三、操作步骤
加样:
空白孔不加样,标准孔加梯度标准品(如1.0ng/mL起始),样本孔加50μL(需预稀释时计算稀释倍数)。
温育:
37℃孵育30分钟,手工洗涤时需拍干,推荐使用含0.05%吐温-20的洗涤液。
显色:
加入TMB避光显色15分钟,终止后15分钟内读取OD值。
四、注意事项
试剂管理:
使用前室温平衡30分钟,不同批号试剂禁止混用。
底物B需严格避光,避免接触金属器械。
操作控制:
加样需精准(推荐排枪),避免气泡或孔壁残留。
显色后若标准孔OD值异常,需检查温育温度或洗涤效果。
五、性能参数
灵敏度:检测浓度≤1.0ng/mL。
重复性:板内/板间变异系数<10%。
如需GUS染色实验方案(如X-Gluc法),可进一步说明需求。
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